植物病理学报杂志投稿格式参考范文：云南彩云红梨炭疽病的病原鉴定

　　从云南省安宁市史家庄村、云南省农业科学院园艺作物研究所的科技示范园(海拔 1900 m，年均温度 19.3 ℃，年降水量 688.6 mm，无霜期 360 d)彩云红梨园(树龄 7 年，株行距 1 m×3.5 m，树势较好，总种植面积 350 亩)采集病果。梨果感病后，果面初期出现黑色点状病斑，后病斑逐渐扩大，中心凹陷，上有呈同心轮纹状排列的黑色点状物。切开病斑，可见果实内部腐烂至果心。采用常规组织分离法分离病菌，进一步通过单孢分离获得纯培养菌株。经初步观察，所获菌株具有一致的菌落形态，从中选取代表菌株 ANCYH-1 进行后续研究。

　　采用分生孢子悬浮液(个)喷雾接种法进行离体果实无伤接种测定致病性，以喷洒无菌水处理的作为对照组。将接种后的梨果置于培养箱(28 ℃、相对湿度 (80±5)%、12 h 光照 / 12 h 黑暗)培养，每日观察发病情况。接种后第 1 d，果面开始出现黑色小斑点，之后病斑逐渐扩大;接种后第 7 d，病斑扩大连接形成不规则型大病斑，梨果出现轻度腐烂，而对照组的梨果没有出现任何症状。对接种后发病的梨果进行病菌再分离，得到的菌株形态与原接种菌株一致，符合柯赫氏法则，表明原接种菌株 ANCYH-1 是引起彩云红梨炭疽病的病原。

　　对供试菌株进行形态学鉴定。在 PDA 培养基上，28 ℃条件下菌丝平均生长速率为19.3mm⋅d−1;气生菌丝发达、致密，绒毛状，白色与黑灰色交替，菌落背面可见黑灰色与白色相间的同心轮纹;子囊壳近球形或梨形，深棕色，具有孔口，内生棍棒状子囊，子囊中有 8 个椭圆形子囊孢子;分生孢子盘大小为 (217.67~273.06) μm，基部聚生分生孢子梗，其上产生大量无色、单胞、棒状分生孢子，大小为 (14.13~18.80) μm×(3.94~5.31) μm;附着胞基部与菌丝相连，浅棕色至深褐色或黑色，圆形或不规则形，边缘完整或呈波浪状，大小为 (10.28~15.03) μm×(7.40~11.12) μm。

　　对供试菌株进行分子生物学鉴定。以 ITS、ACT、TUB 和 CHS 这 4 个基因为靶标进行 PCR 扩增，将扩增产物测序，所得序列提交 GenBank，获得登录号分别为 OK483320(546bp)、OP932953(289bp)、OP941411(734bp)、OP941412(299bp)。利用这些序列在 NCBI 数据库中进行 BLAST 比对，发现 ANCYH-1 菌株的 ITS、ACT、TUB 和 CHS 序列与 Colletotrichum fructicola 的模式菌株 CBS113000 相对应的基因序列 KC566781、KC566927、KC566203 和 KC566348 的同源性高达 99%~100%。利用 MEGA 7 中的最大似然法(Maximum-likelihood, ML)，以 ITS-ACT-TUB-CHS 多基因序列构建系统发育树，结果表明，ANCYH-1 菌株与 Colletotrichum fructicola 的 4 个菌株单独聚为一支，支持值达到 98%。结合菌落形态学特征及多基因序列分析结果，将 ANCYH-1 菌株鉴定为果生炭疽菌(Colletotrichum fructicola)。

　　本文对云南红梨产区引起彩云红梨炭疽病的病原进行分离和鉴定，确定该病由 C.fructicola 侵染引起，与 CHIO 等、KUANG 等、QING 等报道的 C.fructicola 具有一致的形态特征。本研究首次明确了彩云红梨炭疽病的病原，并详细描述了病害症状，为病害发生和流行规律的调查，以及病害监测和防控研究的开展奠定了基础。研究结果对于保障云南省特色红梨产业的健康发展具有重要意义。

何英云;王莉娜;杨光柱;张文;舒群;苏俊,云南省农业科学院园艺作物研究所,202406