低氧通过抑制HectH9介导的肺动脉平滑肌细胞己糖激酶2泛素化和降解诱导肺血管重塑

来源：中华高血压杂志2025年第12期北京时间：

作者：林炜钧, 高谷丰, 蔡知典, 苏芸芸, 练桂丽, 庄伟, 罗莉,

摘要：目的 探讨己糖激酶（HK）2及其泛素化修饰在低氧诱导的大鼠肺动脉高压（PH）和肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）过度增殖中的作用及潜在机制。 方法 纳入 24 只雄性SD大鼠（180～200 g），随机分为常氧对照组、低氧2 周组（常氧14 d，10% O2低氧14 d）与低氧4 周组（10% O2低氧28 d），每组 8只。右心导管法测量大鼠右心室收缩压（RVSP），计算右心室肥厚指数（RVHI）、肺小动脉血管壁面积百分比（WA%）和厚度百分比（WT%），Western-blot法检测肺动脉HK2、E3连接酶HectH9蛋白表达，比色法检测HK活性。体外以1% O2低氧培养PASMCs，Western-blot法检测HK2、HectH9、线粒体动力相关蛋白1（DRP1）、线粒体分裂因子（MFF）和线粒体分裂蛋白1（FIS1）的蛋白表达，比色法检测HK活性、葡萄糖-6-磷酸（G6P）含量，细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法检测细胞增殖水平；免疫荧光法观察线粒体形态，免疫共沉淀分析HK2与HectH9相互作用及HK2 泛素化水平；通过小干扰RNA抑制HectH9观察HK2泛素化、HK2表达及活性、G6P含量及细胞增殖的变化。结果 低氧暴露2周和4周的大鼠RVSP2周（33.72±3.84），4周（50.54±5.30）比常氧（27.34±3.77）mmHg，t=2.96，10.41，均P＜0.01、RVHI2周（38.49±2.13）%，4周（42.38±2.34）% 比常氧（23.65±1.54）%，t=14.61，18.65，均P＜0.01、WA%2周（74.14±4.53）%，4周（88.63±3.81）% 比常氧（55.47±5.60）%，t=7.75，13.76，均P＜0.01及WT%2周（43.61±4.13）%，4周（58.66±3.24）% 比常氧（27.54±4.22）%，t=8.02，15.52，均P＜0.01比常氧组高，肺动脉组织中HK2蛋白表达（均P＜0.05）及HK活性比常氧组强（均P＜0.05），HectH9蛋白表达比常氧组低（均P＜0.05）。低氧48 h的PASMCs中HK2蛋白表达、HK活性、G6P含量、细胞增殖水平和线粒体碎片化程度均高于常氧对照（均P＜0.05），而HectH9表达（P＜0.05）及HK2的泛素化水平低于常氧对照。进一步在低氧条件下转染HectH9质粒后HK2的泛素化水平高于低氧PASMCs；而敲低HectH9的PASMCs中HK2蛋白表达、HK活性、G6P含量及细胞增殖水平均高于常氧对照（均P＜0.05）。 结论 低氧通过下调HectH9表达，抑制HK2的泛素化降解，导致HK2蓄积并扰乱DRP1/MFF依赖的线粒体分裂稳态，促进PASMCs增殖和肺血管重构。

关键词：肺动脉高压,肺动脉平滑肌细胞,低氧,己糖激酶2,泛素化,