代谢综合征肾损害患者尿液外泌体微小RNA差异表达谱的生物信息学分析

来源：中华高血压杂志2023年第8期北京时间：

作者：张勇, 吴庭坤, 李舒静, 陈小青, 谢扬彬, 郭秀丽, 赖素仁, 杨玲婷, 庄永泽, 王丽萍,

摘要：目的 探讨代谢综合征(MS)肾损害患者尿液外泌体中的微小RNA(miRNA)差异表达谱，探究miRNA在MS肾损害发病中的作用。方法 选取2018年5月至2019年12月在联勤保障部队第九〇〇医院确诊为MS肾损害和MS无肾损害的患者，以及健康体检者。利用实时定量PCR技术及高通量测序技术检测MS肾损害患者(MSK组，n=3)及健康体检者(对照组，n=3)尿液外泌体miRNA的表达情况。对差异表达miRNA进行生物信息学分析，探索靶基因的主要生物学功能。对差异表达的miRNA及其靶基因进行临床验证(MS肾损害患者、MS无肾损害患者、健康受试者各14例)。结果 经过高通量测序技术分析，MSK组和对照组之间存在33个差异表达的尿液外泌体miRNA(P<0.05)。经过小样本量的实时定量PCR检测，提取到11个差异表达的miRNA(P<0.05),7个高表达(miRNA-449a, miRNA-449b-5p, miRNA-449c-5p, miRNA-122-3p, miRNA-618,miRNA-217-5p, miRNA-2115-3p),4个低表达(miRNA-4662a-5p, miRNA-1-3p, miRNA-3114-3p, miRNA-95-3p)。最终选取差异有统计学意义且稳定表达的miRNA-449a进行临床验证。京都基因和基因组百科全书(KEGG)富集分析发现，miRNA-449a靶基因主要参与丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路、转化生长因子β(TGF-β)信号通路、Wnt信号通路等信号转导途径。尿液外泌体miRNA-449a在MSK组、MS无肾损害患者组(MS组)和对照组三组间比较，差异存在统计学意义(0.70±0.32比0.42±0.28比0.06±0.06,F=26.062,P<0.001),MSK组的尿液外泌体miRNA-449a表达水平明显上调。尿液外泌体miRNA-449a表达与血肌酐、尿微量白蛋白与肌酐比值呈正相关(P<0.05)。MSK组尿液外泌体miRNA-449a下游靶基因Bcl-2 mRNA相对表达较MS组下调(0.02±0.01比0.06±0.01,t=102.756,P<0.001)。结论 MS肾损害患者尿液外泌体miRNA存在差异性表达。生物信息学分析提示差异表达Bcl-2等基因可能参与MS肾损害的发生和发展。

关键词：代谢综合征,肾损害,尿液外泌体,小分子核糖核酸,生物信息学分析,