缺氧通过磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B-金属调节转录因子1信号通路诱导肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖及迁移
来源：中华高血压杂志2022年第12期北京时间：
作者：吴剑敏, 陈嫒, 练桂丽, 高谷丰, 刘俊萍, 谢良地, 罗莉,
摘要：目的 探索磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)-金属调节转录因子1(MTF-1)信号通路对缺氧诱导的肺动脉高压(PH)大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖和迁移的影响。方法 动物实验：将16只雄性成年Sprague-Dawley(SD)大鼠随机均等分为对照组(Ctrl组)和缺氧诱导的PH组(hypoxia-PH组)。将hypoxia-PH组大鼠置于自制缺氧饲养玻璃箱内氧浓度(10.0±0.2)%,连续缺氧3周后常氧2周建立慢性PH模型，Ctrl组大鼠在无特定病原体(SPF)级房间正常饲养。在造模5周后，右心导管法测定平均肺动脉压(mPAP),HE染色评估肺动脉形态学改变，组织免疫荧光观察MTF-1及胎盘生长因子(PlGF)的表达。Western-blot法检测组织中磷酸化Akt(p-Akt)、总Akt(T-Akt)、MTF-1及PlGF的表达。细胞实验：提取5只正常大鼠来源的PASMC,每只大鼠来源的PASMC分为对照-PASMC(Ctrl)、缺氧-PASMC(hypoxia)和缺氧+PI3K-Akt通路抑制剂LY294002-PASMC(hypoxia+LY294002)组。hypoxia组利用100μmol/L氯化钴干预24 h模拟缺氧条件，hypoxia+LY294002组在氯化钴干预前30 min加入LY294002,Ctrl组未行任何处理。Western-blot法检测细胞中p-Akt、T-Akt、MTF-1及PlGF的表达。通过5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)、流式细胞术和划痕实验评估PASMC增殖及迁移情况。结果 在动物实验中，hypoxia-PH组大鼠出现mPAP升高，肺血管壁增厚，右心室肥厚(均P<0.05)。组织免疫荧光染色及Western-blot可观察到hypoxia-PH组大鼠肺组织中p-Akt、MTF-1及PlGF表达较Ctrl组升高(均P<0.05),而T-Akt差异无统计学意义(P>0.05)。在细胞实验中，Western blot可观察到hypoxia组中p-Akt、MTF-1及PlGF表达较Ctrl组升高(均P<0.05),而LY294002可逆转这一结果。同时，EdU、流式细胞术及划痕实验显示hypoxia组的增殖迁移水平较Ctrl组增高，而LY294002可抑制这一过程EdU实验阳性细胞比例：Ctrl (0.33±0.06)%比hypoxia (0.86±0.06)%比hypoxia+LY294002(0.41±0.14)%,F=24.13,P<0.01;流式细胞术G2+M细胞比例：Ctrl(4.49±0.39)%比hypoxia(16.86±1.74)%比hypoxia+LY294002(4.99±0.48)%,F=195.70,P<0.01;划痕实验细胞迁移率，24 h:Ctrl (21.80±3.88)%比hypoxia (41.53±1.96)%比hypoxia+LY294002 (25.94±6.63)%,F=15.47,P<0.01;48 h:Ctrl (39.92±1.06)%比hypoxia (73.01±3.96)%比hypoxia+LY294002 (42.97±4.80)%,F=75.61,P<0.01。结论 缺氧可激活PI3K-Akt信号通路，进而促进MTF-1及PlGF表达，最终促进PASMC增殖及迁移。
关键词：肺动脉高压,缺氧,脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B信号通路,金属调节转录因子1,胎盘生长因子,
