自体肿瘤细胞疫苗调控树突细胞抑制骨肉瘤术后复发的实验研究

来源：中华骨科杂志2026年第02期北京时间：

作者：冷正林,周京元,索南昂秀,郭强,刘立民,周海斌

单位：青海省人民医院,青海省人民医院,青海省人民医院,青海省人民医院,青海省人民医院,苏州大学附属第二医院

摘要：目的 探讨环鸟苷酸-腺苷酸（cyclic GMP-AMP，cGAMP）-肿瘤相关抗原（tumor-associated antigen，TAA）@磷酸钙（CaP）纳米粒疫苗对树突细胞的免疫激活作用和抑制骨肉瘤术后复发的效果。方法 制备cGAMP-TAA@CaP纳米粒疫苗，检测疫苗中的Ca 含量、抗原含量和种类，检测纳米粒对K7M2和DC2.4细胞的毒性。采用模拟液分别模拟正常、肿瘤和溶酶体环境，使用Ca 检测试剂盒检测纳米粒在不同模拟液中Ca 释放水平，使用扫描电镜观察纳米粒的降解，定量分析树突细胞对纳米粒的内吞和细胞内定位。分别将PBS（PBS组）、游离2′3′-cGAMP（cGAMP组）、纳米粒疫苗（纳米粒疫苗组）与骨髓来源树突细胞共孵育，检测三组树突细胞表面CD86和主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex，MHC）Ⅱ的表达水平百分比以及肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF）-α、干扰素（interferon，IFN）-β的表达量。构建小鼠肿瘤模型，分为对照组、手术组、手术+cGAMP组以及手术+纳米粒疫苗组，对照组仅皮下注射生理盐水，不接受手术处理；其余三组小鼠实施肿瘤切除术，并在术后于肿瘤原位分别注射生理盐水（手术组）、2′3′-cGAMP（手术+cGAMP组）、纳米粒疫苗（手术+纳米粒疫苗组）。检测各组小鼠肿瘤组织IFN-γ T细胞百分比、颗粒酶（Granzyme）B T细胞百分比；采用免疫荧光染色定量分析脾脏组织中CD4 T细胞百分比、CD8 T细胞百分比；取小鼠肺组织进行HE染色，观察肿瘤远处肺转移情况。 结果 纳米粒大小和分布均匀，平均水合粒径为132 nm，主要成分为磷酸钙。纳米粒中Ca +含量为（118.2±6.5）μg、K7M2细胞中为（0.4±0.2）μg，纳米粒中抗原的含量和种类与肿瘤细胞一致。当纳米粒浓度达到200 μg/ml时，K7M2和DC 2.4细胞的活性均在85%以上。体外微环境模拟实验显示纳米粒在溶酶体模拟液中Ca 释放水平高于在正常及肿瘤微环境模拟液中。纳米粒与树突细胞共孵育24 h时，纳米粒被树突细胞内吞的数量逐渐增加并定位于溶酶体；48 h时，纳米粒疫苗组树突细胞表面CD86和MHCⅡ的表达水平百分比（61.1%±5.6%）以及TNF-α[（45.7±2.5）pg/ml]、IFN-β[（58.5±3.5）pg/ml]的分泌水平均高于PBS组和cGAMP组，差异有统计学意义（ <0.05）。手术+纳米粒疫苗组小鼠肿瘤组织中IFN-γ T细胞百分比（37.0%±1.6%）、Granzyme B T细胞百分比（33.3%±1.9%）以及脾脏组织中CD4 T细胞百分比（45.8%±2.4%）、CD8 T细胞百分比（37.5%±1.1%）均高于对照组、手术组和手术+cGAMP组，差异有统计学意义（ <0.05）。手术+纳米粒疫苗组小鼠术后第41天生存率仍为100%，肺组织HE染色示肿瘤无远处肺转移。 结论 cGAMP-TAA@CaP纳米粒疫苗生物相容性良好，可通过调控树突细胞功能激活抗肿瘤免疫来有效抑制小鼠骨肉瘤术后的肿瘤复发和远处转移，延长生存期。

关键词：纳米疫苗;免疫，细胞;树突细胞;骨肉瘤

基金资助：青海省科技计划项目2024-ZJ-709