三代纳米孔测序技术在脊柱结核诊断中的应用与效能分析

来源：中华骨科杂志2026年第01期北京时间：

作者：胡胜平,马灌楠,石仕元,汪翼凡,周子懿,费骏

单位：杭州市红十字会医院,杭州迪安医学检验中心,杭州市红十字会医院,杭州市红十字会医院,浙江中医药大学,杭州市红十字会医院

摘要：目的 探讨基于纳米孔的宏基因组三代测序技术（metagenomics third generation sequencing，mTGS）在脊柱结核分枝杆菌感染分子诊断中的效能，并与传统微生物检测（conventional microbiology tests，CMTs）、宏基因组二代测序技术（metagenomic next generation sequencing，mNGS）进行比较。方法 回顾性分析2023年1月至2024年4月于浙江省中西医结合医院就诊的45例疑似脊柱结核患者资料，男34例、女11，年龄（65.4±15.3）岁（范围31~86岁）。采集患者的组织样本及病灶灌洗液或脓液样本，分别采用CMTs、mNGS及mTGS进行检测。以临床诊断及病原学、病理学证据为诊断标准，比较三种方法的准确度、灵敏度、特异性、平衡准确度、F1值、阳性似然比、阴性似然比、约登指数、Kappa一致性系数。比较组织、病灶灌洗液或脓液样本采用三种方法检测结核分枝杆菌的效能。比较mNGS、mTGS检测均为阳性的样本中两种方法检出结核分枝杆菌序列数的差异。分析mNGS、mTGS检出结核分枝杆菌序列数与实验室指标的相关性。结果 45例患者中37例确诊为脊柱结核。CMTs、mNGS、mTGS的准确度分别为55.56%、84.44%、88.89%，灵敏度分别为45.95%、81.08%、86.49%，差异均有统计学意义（χ =11.609， =0.003；χ =10.553， =0.005）。三者特异性均为100.0%。CMTs、mNGS及mTGS的平衡准确度分别为0.730、0.905、0.932，F1值分别为0.630、0.896、0.928，阳性似然比分别为8.289、14.447、15.395，阴性似然比分别为0.571、0.209、0.153，约登指数分别为0.459、0.811、0.865，Kappa一致性系数分别为0.232、0.604、0.695。在mNGS、mTGS检测均为阳性的26例样本中，mNGS检出结核分枝杆菌序列数为23（13，192），低于mTGS的188（6，4561），差异有统计学意义（ =-2.825， =0.005）。mTGS对病灶灌洗液或脓液样本检测的阳性率为87.0%，高于组织样本的54.5%，差异有统计学意义（χ =5.750， =0.017）。mNGS检出结核分枝杆菌序列数与中性粒细胞比率、血小板计数、C反应蛋白、红细胞沉降率呈正相关，与淋巴细胞比率呈负相关；mTGS检出结核分枝杆菌序列数与白细胞计数、中性粒细胞比率、血小板计数、C反应蛋白、红细胞沉降率呈正相关，与淋巴细胞比率呈负相关（ <0.05）。 结论 mTGS在脊柱结核分枝杆菌感染中的诊断效能良好，与mNGS相比结核分枝杆菌序列覆盖度更高，对低菌量样本具有一定的潜在优势。mTGS在病灶灌洗液或脓液样本中表现出更高的阳性率。mNGS、mTGS检出结核分枝杆菌序列数与部分实验室指标存在一定相关性。

关键词：结核，脊柱;纳米孔测序;宏基因组;分子诊断技术

基金资助：杭州市生物医药和健康产业发展扶持科技专项2022WJC263