强直性脊柱炎患者血清中长链非编码RNA差异性表达的初步筛查

来源：中华骨科杂志2019年第18期北京时间：

作者：刘卓劼,邱勇,钱邦平

单位：南京市鼓楼医院,南京市鼓楼医院,南京市鼓楼医院

摘要：目的 初步筛查强直性脊柱炎（ankylosing spondylitis，AS）患者血清中差异性表达的长链非编码核糖核酸（long noncoding RNA，lncRNA），为AS早期诊断及药物靶向治疗提供潜在新型分子标志物。方法 收集2017年1月至9月于南京鼓楼医院脊柱外科就诊的AS患者及同时段体检的健康对照血清样本各19例，AS组及对照组年龄分别为（38.74±7.42）岁和（37.00±6.86）岁。选取年龄相近的男性AS患者及健康对照血清样本各3例行高通量lncRNA测序，并根据表达差异的 值及倍数大小从测序结果中筛选出待验证的lncRNA。于AS组及对照组剩余各16例中利用TRizol试剂快速提取法提取RNA，逆转录为cDNA后针对待验证lncRNA行RT-qPCR验证测序所得结果。 结果 高通量lncRNA测序发现AS组与对照组血清中差异性表达的lncRNA共43个，其中41个表达上调，2个表达下调。根据表达差异的 值排序后，从测序结果选取差异倍数>2的lncRNA作为待验证的目标基因，共4个：ENST00000365494.1（ =2.62×10 ，2.05倍）；ENST00000364938.1（ =2.49× ，2.19倍）；ENST00000363046.1（ =2.67× ，2.51倍）；ENST00000384756.1（ =6.17×10 ，2.28倍）。RT-qPCR结果示：ENST00000365494.1的相对表达量为1.80±0.22（ =0.304），ENST00000364938.1的相对表达量为0.78±0.07（ =0.417），ENST00000363046.1的相对表达量为1.28±0.24（ =0.793），ENST00000384756.1的相对表达量为1.52±0.25（ =0.611）。其中3个lncRNA呈上调趋势，符合测序所得结果，但其相对表达量的差异均未达统计学意义。 结论 验证测序所得AS患者血清中lncRNA的表达差异阴性结果，提示差异性表达的lncRNA可能未存在于外周血中，未来相关研究可偏向于病灶组织中差异性表达lncRNA的鉴定与功能探究。

关键词：脊柱炎，强直性;调控序列，核糖核酸;基因表达