微小RNA-30b 通过下调活化T 细胞核因子c1 抑制大鼠血管平滑肌细胞钙化

来源：中国血液净化杂志2021年第10期北京时间：

作者：何雷, 周薇, 白亚玲, 张胜雷, 张东雪, 刘兰, 徐金升

单位：1河北医科大学第四医院肾内科

摘要：【摘要】目的观察微小RNA(microRNA，miRNA)-30b通过调控活化T细胞核因子c1(nuclear factor of activated T-cell c1, NFATc1)对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)钙化的作用及机制。方法大鼠体外原代培养VSMCs，并分为正常组和高磷组。采用ELISA法测定各组VSMCs碱性磷酸酶(ALP)的活性；采用茜素红染色及钙含量检测各组VSMCs 的钙化；采用实时荧光定量PCR测定各组VSMCs miR-30b及NFATc1和Runx2表达，Western blot检测NFATc1、Runx2的蛋白表达。为进一步验证miR-30b对VSMCs的作用，给予miR-30b的类似物mimic-30b和抑制物inhibitor-30b，检测VSMCs的钙化及NFATc1、Runx2的表达和ALP的活性变化。结果与正常组比较，高磷诱导的VSMCs钙化增加(t=-13.324, P＜0.001)；NFATc1的RNA和蛋白表达量升高(t值分别为为-4.621、-4.684, P值分别为0.010、0.009)；Runx2的RNA和蛋白表达量升高(t值分别为-4.340、-3.860, P值分别为0.005、0.018)；ALP活性升高(t= -12.636, P＜0.001)；miR-30b的表达降低(t=3.822, P=0.019)。转染inhibitor-30b后，inhibitor-30b组较未转染组、inhibitor-NC组的钙含量升高(F=606.554, P＜0.001)；NFATc1 的RNA和蛋白表达量升高(F 值分别为36.427、22.512, P 值分别为＜0.001、0.002)；Runx2 的RNA 和蛋白表达量升高(F 值分别为44.225、42.832，P 值分别为＜0.001、＜0.001)；ALP 活性升高(F=347.356, P＜0.001)。转染mimic-30b后，钙化降低(F=93.341，P＜0.001)；NFATc1 的RNA 和蛋白表达量降低(F值分别为69.841、6.090, P值分别为＜0.001、0.036)；Runx2的RNA和蛋白表达量降低(F值分别为44.780、841.081, P值分别为0.005、＜0.001)；ALP 活性降低(F=197.829，P＜0.001)。结论miRNA-30b 可抑制VSMCs 钙化，可能是通过下调NFATc1，进而下调Runx2表达，从而使VSMCs表型转化减少实现的。

关键词：血管平滑肌细胞,血管钙化,表型转化,miR-30b,T细胞核因子c1

基金资助：河北省临床医学优秀人才培养项目[冀财社(2019)139 号]；河北省医学技术跟踪项目(G2018050)；河北省适宜卫生技术推广项目(P20190009)；河北省重点研发计划项目(20377704D)；河北省医学科学研究重点课题(20150310)