赖氨酸甲基转移酶SET8 介导损伤调节自噬基因调控血管平滑肌细胞凋亡的研究

来源：中国血液净化杂志2021年第11期北京时间：

作者：张东雪, 刘兰, 张胜雷, 崔立文, 冯青燕

单位：1河北医科大学第四医院肾内科

摘要：【摘要】目的探讨赖氨酸甲基转移酶SET8(lysine methyltransferase SET8)介导损伤调节自噬基因(damage-regulated autophagy modulator 1，DRAM1)调控血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)凋亡的作用及机制。方法体外原代培养VSMCs，采用脂质体转染法处理细胞，将细胞分为3 组，正常组，SET8-NC 组(转染对照NS-shRNA 质粒)，SET8-shRNA 组(转染SET8-shRNA 质粒)。采用MTT比色法检测各组细胞增殖情况；原位末端标记法TUNEL 染色检测细胞凋亡情况；Western blot 检测各组细胞SET8、DRAM1、B 细胞淋巴瘤/白血病-2(bcelllymphoma2，Bcl-2)、Bcl-2 相关x 蛋白(Bcl-2 assaciated X protein，Bax)的表达情况。为验证DRAM1 对VSMCs 凋亡的影响，转染DRAM1 高表达，将细胞分为3 组，正常组，DRAM1-NC 组，DRAM1 组。检测各组细胞增殖凋亡情况及DRAM1、Bax 和Bcl-2的蛋白表达情况。结果①与正常组和SET8-NC 组比较，MTT 结果显示SET8-shRNA 组细胞于12h、24h、36h、48h 增殖降低(F=267.649，P＜0.001；F=477.534，P＜0.001；F=28.938，P=0.001；F=145.849，P＜0.001)，TUNEL 染色结果显示SET8-shRNA 组绿色荧光颗粒显著增多。Western blot 结果显示，与正常组和SET8-NC 组比较，SET8- shRNA 组SET8、Bcl- 2 表达降低(F=34.247,P=0.001；F=39.218,P＜0.001)，DRAM1、Bax 表达升高(F=84.517,P＜0.001；F=15.570,P=0.004)。②与正常组和DRAM1-NC 组比较，MTT 结果显示DRAM1 组细胞于12h、24h、36h、48h 增殖降低(F=347.170，P＜0.001；F=74.621，P＜0.001；F=56.427，P＜0.001；F=393.547，P＜0.001)，TUNEL 染色结果显示DRAM1 组绿色荧光颗粒显著增多。Western blot 结果显示，与正常组和DRAM1-NC 组比较，DRAM1 组DRAM1 和Bax 表达升高(F=26.456,P=0.001；F=25.217,P=0.001)，Bcl-2 表达降低(F=626.70,P＜0.001)。结论SET8 低表达可促进血管平滑肌细胞发生凋亡，可能机制是通过上调DRAM1表达，促进凋亡蛋白Bax 表达，进而引起血管平滑肌细胞发生凋亡。

关键词：血管平滑肌细胞,赖氨酸甲基转移酶SET8,自噬调节因子1,凋亡

基金资助：河北省医学科学研究重点课题(20180513、20190702)