利用邻近标记技术检测心肌细胞的分泌蛋白组

来源：中国心血管杂志2025年第06期北京时间：

作者：何洁清,郭聪婷,李际婷,柏宝辰,王泽,郭宇轩,刘健

摘要：目的利用邻近标记技术建立检测心肌细胞分泌蛋白组的新方法。方法通过分子克隆技术构建质粒，用于表达内质网(ER)定位的TurboID蛋白。在生物素处理的HEK293T细胞中，通过免疫荧光成像和免疫印迹实验(Westernblot)对TurboID蛋白的表达、亚细胞定位和邻近标记功能进行验证。在上述质粒基础上包装腺病毒，侵染原代新生大鼠心室肌细胞(NRVM)，加入生物素处理后，使用链霉亲和素磁珠对NRVM培养上清中NRVM细胞分泌的生物素化蛋白进行富集，进行蛋白质质谱分析，检测分泌蛋白组。结果在HEK293T细胞和NRVM中，免疫荧光成像结果显示，TurboID蛋白能够定位在细胞核周围对应的ER区域。在添加生物素的作用下，Westernblot结果显示，TurboID能将ER蛋白生物素化。用链霉亲和素磁珠对NRVM培养上清中的生物素化蛋白进行富集后，通过蛋白质质谱分析，结果发现心肌细胞的ER、细胞膜和细胞外的蛋白质被显著富集，包括经典的心肌细胞分泌蛋白质心房利尿钠肽。对不含ER-TurboID的NRVM培养上清进行蛋白质组分析，主要获得白蛋白等培养基中的成分，难以检测到心肌细胞的分泌蛋白质。结论ER-TurboID技术可有效富集和检测心肌细胞通过ER分泌的蛋白质组，并排除培养基中非细胞来源蛋白的干扰。

关键词：心肌细胞;分泌蛋白组;邻近标记技术

基金资助：国家重点研发计划2022YFA1104801