牛磺熊去氧胆酸通过调节内质网应激抑制转化生长因子β1所诱导的心肌成纤维细胞纤维化

来源：中国心血管杂志2024年第02期北京时间：

作者：张含林,林辉,郭航远

摘要：目的探讨牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)对转化生长因子β1(TGF-β1)所诱导的心肌成纤维细胞(CFs)活化的作用及相关机制，为TUDCA治疗糖尿病心肌纤维化提供新的治疗目标。方法提取原代SD乳鼠CFs和心肌细胞，通过免疫荧光法鉴定CFs的纯度。分别将高糖培养下的CFs用不同时间的TGF-β1干预，用Westernblot检测内质网应激(ERS)通路相关蛋白和纤维化指标的表达，探讨TGF-β1对CFs活化及ERS相关通路的影响。用Westernblot检测CFs和心肌细胞内同型半胱氨酸内质网应激泛素样结构域1(Herpud1)的表达情况。通过沉默的表达及用Transwell和Westernblot检测沉默后CFs纤维化指标的表达，探讨在TGF-β1诱导的CFs活化中的作用。用CCK-8检测不同浓度的TUDCA处理下CFs的活力。用免疫荧光和Westernblot检测TUDCA对TGF-β1诱导的CFs中Herpud1、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、转录激活因子6(ATF6)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)和Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)表达的影响。为进一步明确在TUDCA抑制CFs活化中的作用，用Westernblot检测过表达后相关蛋白的表达情况。结果在成功构建CFs纤维化模型的基础上，TGF-β1能够诱导CFs活化及ERS通路相关蛋白的表达；Herpud1在CFs中的表达高于心肌细胞；敲除可抑制TGF-β1所诱导的CFs活化；TUDCA能显著降低TGF-β1诱导的CFs中GRP78、ATF6、α-SMA、Vimentin和CollagenⅠ的表达水平；此外，过表达还可逆转TUDCA对TGF-β1诱导的CFs活化的抑制。结论下调基因的表达是TUDCA抑制TGF-β1诱导的CFs纤维化的机制之一。

关键词：心肌成纤维细胞;Herpud1;牛磺熊去氧胆酸;转化生长因子β1;纤维化

基金资助：国家自然科学基金青年项目82200390