微小RNA34a下调沉默信息调节因子1抑制内皮祖细胞功能的机制研究

来源：中国心血管杂志2019年第06期北京时间：

作者：马璐,王玉强,何青,杨秀红,李明,魏延津

摘要：目的分析氧化应激过程中微小RNA34a(miR-34a)下调沉默信息调节因子1(SIRT1)在内皮祖细胞功能障碍中的机制。方法本实验采用不同浓度的过氧化氢(HO)处理内皮祖细胞，通过CCK-8检测细胞的存活率；运用化学合成的方法合成miR-34a模拟物、miR-34a抑制物及其各自对照组转染至内皮祖细胞后，并用500μMHO刺激，用RT-PCR验证miR-34a表达水平，利用流式细胞仪检测HO刺激miR-34a诱导细胞凋亡情况，通过qRT-PCR方法和Westernblot技术检测SIRT1中mRNA和蛋白的表达水平。结果CCK-8检测发现，细胞存活率随着HO浓度的增加而逐渐降低，呈现浓度依赖性；与不加HO相比，加入100、200、500和800μM的HO细胞存活率分别为94%±2%、85%±2%、78%±2%和32%±1%，差异具有统计学意义(＝16.3，<0.001)。HO刺激内皮祖细胞后，转染miR-34a模拟物的表达水平高于其对照组(＝16.0，＝0.003)，转染miR-34a抑制物的表达水平低于其对照组(＝53.0，＝0.000)。通过细胞凋亡检测miR-34a模拟物组细胞凋亡率明显升高(＝30.4，<0.001)，miR-34a抑制物组细胞凋亡率明显降低(＝8.7，<0.001)。qRT-PCR结果显示，miR-34a模拟物组中的靶基因SIRT1相对表达量低于其对照组(＝87.7，<0.001)，miR-34a抑制物组中的靶基因SIRT1相对表达量高于其对照组(＝125.0，<0.001)。Westernblot结果显示miR-34a的模拟物与其对照组相比，SIRT1蛋白表达量明显下降(＝4.1，＝0.014)，而miR-34a的抑制物与其对照组相比，SIRT1蛋白表达明显增高(＝7.1，＝0.002)。结论在氧化应激状态下，使用miR-34a的模拟物及抑制物可以调节miR-34a的表达，改变SIRT1中蛋白的表达。内皮祖细胞功能障碍可能与miR-34a水平升高及其靶蛋白SIRT1的表达下降相关。

关键词：内皮祖细胞;氧化应激;微小RNA34a;沉默信息调节因子1

基金资助：山东省自然科学基金项目ZR2018H032