藏绵羊溶菌酶1基因的克隆、原核表达及生物信息学分析

来源：中国畜牧兽医杂志2015年第1期北京时间：

作者：江伟华, 朱莲莲, 刘益丽, 林忠荔, 江明锋

单位：1. 青藏高原研究院, 成都 610041;2. 动物遗传育种国家民委—教育部重点实验室, 成都 610041;3. 西南民族大学生命科学与技术学院, 成都 610041

摘要：试验旨在研究藏绵羊溶菌酶(lysozyme,LZM)1基因在瘤胃、瓣胃、皱胃、气管、肝脏和肾脏各组织中的表达情况、进化关系及抑菌活性.采用RT-PCR技术克隆藏绵羊LZM1基因,定量PCR检测LZM1基因在瘤胃、瓣胃、皱胃、气管、肝脏和肾脏中的表达情况,并将该基因的氨基酸序列与普通牛胃LZM等氨基酸序列进行比对,根据邻位连接法构建系统进化树;将该基因插入pET-32a质粒后构建得到pET-32a-LZM1重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞并诱导表达,SDS-PAGE法鉴定表达产物;采用比浊法测定LZM1蛋白的活性;采用琼脂糖平板扩散法研究异源表达蛋白的抑菌活性.结果表明,从藏绵羊瘤胃、瓣胃、皱胃、气管、肝脏和肾脏各组织中成功克隆藏绵羊LZM1基因,其在瘤胃、瓣胃、皱胃、气管、肝脏和肾脏中均有表达,在皱胃中表达量最高;其氨基酸序列与普通牛胃LZM(GenBank登录号:NM_001080339.1)序列的同源性最高(96%);重组蛋白LZM1分子质量约为35 ku;其比活力约为400 U/mL;该重组LZM1对金黄色葡萄球具有良好的抑菌活性.

关键词：藏绵羊;溶菌酶;克隆;原核表达;序列分析

基金资助：中央高校基本科研业务费专项资金(2014NZYQN59);自然科学基金(31172198);教育部科学技术研究重点项目(2102654);2014年研究生创新型科研项目(CX2014SZ121)