中国2个地方品系猪SLA-3原核表达载体构建及表达

来源：中国畜牧兽医杂志2015年第2期北京时间：

作者：苟东洲, 戴琳, 杨杰, 高凤山

单位：大连大学生命科学与技术学院, 大连 116622

摘要：为构建中国地方品系荷包猪及莱芜黑猪SLA-3(命名为SLA-3-HB和SLA-3-LW)原核表达载体及表达目的蛋白,试验通过PCR扩增获得SLA-3胞外区基因,并克隆至pMD19-T Simple载体,转化大肠杆菌Top10感受态细胞,酶切及测序筛选阳性重组质粒;重组质粒经酶切回收,目的片段进一步连接pET-21a(+)表达载体,并转化大肠杆菌BL21感受态细胞,IPTG诱导目的基因的表达;SDS-PAGE检测目的蛋白。结果显示,PCR成功扩增SLA-3-HB及SLA-3-LW胞外区,大小约850 bp,目的基因成功克隆至pMD19-T Simple载体,并筛选序列正确的阳性重组质粒。进一步研究证实,SLA-3-HB及SLA-3-LW成功连接到表达载体pET-21a(+),插入片段长度均为831 bp。经诱导后,SLA-3-HB及SLA-3-LW均成功表达,表达蛋白大小为31 ku,相对表达含量达到40%。本研究成功构建了中国地方品系荷包猪及莱芜黑猪SLA-3原核表达载体,为进一步研究其结构和功能奠定基础。

关键词：荷包猪;莱芜黑猪;SLA-3;表达

基金资助：国家自然科学基金项目(31172304);2014年辽宁省大学生创新创业训练计划项目(201411258068);2013年大连大学大学生创新创业训练计划项目(2013071)