重组蓖麻毒素A链表达及其与天然蓖麻毒素毒性比较研究

来源：中国畜牧兽医杂志2015年第4期北京时间：

作者：曲英龙, 钱爱东, 钱军, 计越, 郑关雨, 郭振东, 赵思言, 付莹莹, 张毅, 赵红艳, 陈龙, 刘林娜

单位：1. 吉林农业大学动物科学技术学院, 长春 130118;2. 军事医学科学院军事兽医研究所, 吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室, 长春 130122;3. 吉林省畜牧总站, 长春 130062

摘要：本试验旨在制备有高生物活性的重组蓖麻毒素A链(r-RTA)并与天然蓖麻毒素(n-RT)进行毒性比较.根据NCBI公布的RTA序列合成基因片段,并将其克隆于pET-28a载体后,利用大肠杆菌进行原核表达,镍柱亲和层析纯化上清,500 mmol/L咪唑溶液洗脱获得可溶性r-RTA蛋白,通过SDS-PAGE及Western blotting对其进行鉴定并用ELISA测定其免疫原性后,对r-RTA与n-RT进行动物和细胞试验毒性比较研究.结果显示,该r-RTA在上清中表达率为31.2%;每升细菌培养物纯化后可得20 mg目的蛋白,纯度≥90%,大小为32 ku.其免疫原性约为n-RT的1.27倍;通过获取的n-RT细胞半抑制浓度(IC50为0.01 μg/mL)及动物半数致死量(LD50为(3.27±0.44) μg/kg),以相同浓度进行细胞感染和动物攻毒试验,结果显示,同等剂量下,在细胞试验中,n-RT毒力是r-RTA的2 700倍;在动物试验中,n-RT组对动物致死率为40%,r-RTA组动物无死亡.结果表明,单独RTA,在没有RTB协助下,具有一定的毒性作用,但毒力将显著降低.该结果将为开发基于RTA的蓖麻毒素疫苗提供重要数据和理论支撑.

关键词：蓖麻毒素A链(RTA);原核表达;天然蓖麻毒素(n-RT);毒性比较

基金资助：国家自然基金(31101858);总后科研重大项目(AWS12J005)