奶牛早孕因子重组蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备

来源：中国畜牧兽医杂志2015年第4期北京时间：

作者：刘云, 贾斌, 石峰, 李鑫, 李洪涛, 张永生, 宁梦影, 纪俊明, 秦炳燕

单位：1. 石河子大学动物科技学院, 石河子 832003;2. 石河子大学生命科学学院, 石河子 832003;3. 石河子大学医学院, 石河子 832003

摘要：本研究旨在表达、纯化奶牛早孕因子重组蛋白及制备多克隆抗体.本试验构建奶牛早孕因子重组蛋白原核表达载体pET32a-EPF,转化至大肠杆菌BL21(DE3)内进行诱导表达,SDS-PAGE切胶纯化的早孕因子重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,并用Western blotting和ELISA对重组蛋白及抗体进行检测.结果显示,成功表达并纯化了奶牛早孕因子重组蛋白,重组蛋白分子质量约37 ku,表达量约占菌体总蛋白的48.6%,纯化后目的蛋白纯度可达93%,重组蛋白可与所制备的多克隆抗体结合,ELISA测定的抗体效价为1:12 800.结果表明,本研究成功表达并纯化了奶牛早孕因子重组蛋白,为研究奶牛早孕诊断奠定基础.

关键词：早孕因子;原核表达;SDS-PAGE;Westernblotting;ELISA

基金资助：兵团博士基金项目(Zfy基因干扰生产奶牛性控精液的研究(2012BB016))