鉴别猪伪狂犬病病毒gE基因缺失疫苗和野毒感染的二重PCR诊断方法的建立和应用

来源：中国畜牧兽医杂志2015年第4期北京时间：

作者：赵雪丽, 闫若潜, 吴志明, 曹伟伟, 王淑娟, 谢彩华, 马震原, 周兵强, 王东方

单位：1. 河南省动物疫病预防控制中心, 郑州 450008;2. 河南科技大学动物科技学院, 洛阳 471003

摘要：为建立猪伪狂犬病病毒(PRV)gE基因缺失疫苗和野毒感染的快速鉴别诊断方法,本研究根据猪伪狂犬病野毒具有gD表面抗原基因和gE毒力基因,而基因缺失疫苗只有gD基因无gE基因的特性,针对gD/gE基因的5'端核苷酸序列自行设计引物,建立鉴别PRV gE基因缺失疫苗和野毒感染的二重PCR诊断方法,并进行了特异性、敏感性和重复性试验;利用所建立的检测方法对临床疑似样品进行了检测.结果表明,成功建立了鉴别PRV gE基因缺失疫苗和野毒感染的二重PCR诊断方法,该方法灵敏度高,最低检出限为100拷贝/μL;重复性好;特异性强,可特异性地扩增出PRV细胞毒中的gD和gE基因及gE基因缺失疫苗毒中的gD基因,但对PK-15细胞和猪流行性腹泻病毒等其他8种病原扩增不出任何条带;自835份临床疑似PRV感染病料中共检测出PRV gD和gE基因双阳性样品即野毒感染阳性样品267份,PRV gD基因单阳性样品28份,选取该方法检测出的26份PRV野毒感染阳性样品用于病原分离培养,两种方法的符合率为96.1%.说明本试验建立的二重PCR鉴别诊断方法快速、灵敏、特异,对于临床上疫苗毒和野毒感染的快速鉴别诊断具有重要意义.

关键词：猪伪狂犬病病毒;gE基因缺失疫苗')">gE基因缺失疫苗;gD/gE基因')">gD/gE基因;二重PCR;鉴别诊断

基金资助：河南省科技攻关计划项目“猪流行性腹泻病毒分子流行病学调查及其致病性研究”(132102110159)