牛轮状病毒UK株NSP1基因序列分析及原核表达

来源：中国畜牧兽医杂志2015年第5期北京时间：

作者：冉旭华, 曹思, 张峣, 魏晓曼, 闻晓波, 倪宏波, 朱战波

单位：黑龙江八一农垦大学预防兽医学省重点实验室, 大庆 163319

摘要：轮状病毒是引起多种幼龄动物及5周龄以下儿童腹泻的主要病原体。NSP1非结构蛋白是轮状病毒基因5的产物,为长约55 ku的RNA结合蛋白。现已发现NSP1蛋白是一种毒力决定因子,可颉颃宿主先天性免疫应答。参照GenBank收录的牛轮状病毒UK株序列设计并合成1对特异性引物,本试验利用RT-PCR方法扩增牛轮状病毒UK株NSP1基因,克隆入pET-28a(+)表达载体,经双酶切和测序鉴定,并利用分子生物学软件进行同源性比对分析。本试验结果显示获得的NSP1基因全长编码区序列为1 473 bp,编码491个氨基酸,与美国WC3株同源性最高。将阳性重组质粒转入E.coli Rosetta(DE3)宿主菌,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blotting对重组蛋白进行分析,结果表明重组蛋白分子质量约为55 ku,以包涵体形式表达,可与鼠抗His-tag抗体反应。本试验成功获得牛轮状病毒UK株NSP1基因,且实现了在原核表达系统中高效表达重组蛋白,本试验结果为研究NSP1蛋白在细胞内定位与其活性之间的相互关系奠定了基础。

关键词：牛轮状病毒UK株;NSP1;序列分析;原核表达

基金资助：国家自然科学青年基金(31201909);黑龙江博士后科研启动资助项目 (LBH-Q13134);黑龙江省自然科学青年基金(QC2013C028)