化脓隐秘杆菌TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立

来源：中国畜牧兽医杂志2015年第5期北京时间：

作者：刘二龙, 卢丽, 唐婕, 吕英姿, 郑高彬, 蒋湘

单位：1. 广东出入境检验检疫局, 广州 510730;2. 陕西省动物研究所, 西安 710032

摘要：本试验旨在建立检测化脓隐秘杆菌(Arcanobacterium pyogenes,A.pyogenes)特异、灵敏的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。根据GenBank公布的化脓隐秘杆菌溶血素(pyolysin,PLO)基因高保守序列,设计特异性引物和探针建立检测体系,用于化脓隐秘杆菌的快速检测,并对该方法的特异性和灵敏度进行检测。结果显示,本试验建立的TaqMan实时荧光定量PCR方法仅对化脓隐秘杆菌的检测结果为阳性;该方法最低检测DNA浓度为77.6 fg,最低检测细菌浓度为63 CFU/mL。采用本研究建立的方法检测23份林麝临床病例样品,共鉴定出16株化脓隐秘杆菌,与API Coryne生化鉴定方法的结果相同。本研究为化脓隐秘杆菌的检测提供了一种灵敏、特异、快速的检测方法,其可用于化脓隐秘杆菌的诊断和流行病学调查。

关键词：化脓隐秘杆菌;TaqMan实时荧光定量PCR;溶血素(PLO)

基金资助：陕西省科学院应用基础专项(2013K-12)