抗STa多克隆抗体的制备、鉴定和纯化

来源：中国畜牧兽医杂志2015年第5期北京时间：

作者：胡文丽, 匡雪, 简宗辉, 王皓然, 段锐锐, 陈培富

单位：1. 云南农业大学动物科学技术学院, 昆明 650201;2. 云南省曲靖农业学校, 曲靖 655000

摘要：产肠毒素大肠杆菌(ETEC)可引起人及动物急性腹泻,其关键毒力因子为耐热肠毒素(ST)。由于ST是一种具有强烈毒性但缺乏免疫原性的小分子肽,如何在保持其免疫原性的同时减弱其毒性已成为制备ST类毒素疫苗的研究热点。本试验以利凡诺法提纯兔血清白蛋白(RSA),经0.2%戊二醛活化,再与人工合成的甲醇可溶性STa偶联,十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示获得分子质量约108.5 ku的完全抗原。用该偶联物免疫新西兰白兔4次,采集抗血清并用Protein A/G 琼脂糖小珠进行纯化,斑点酶联免疫吸附试验(dot-ELISA)和免疫印迹(Western blotting)结果显示抗血清效价均为1:400。试验结果表明抗STa多克隆抗体成功制备,这为筛选ST结构类似物做有益的铺垫。

关键词：耐热肠毒素(ST);偶联物;多克隆抗体

基金资助：云南省高端科技人才引进计划项目(2009CI125)