小鼠骨桥蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备与鉴定

来源：中国畜牧兽医杂志2015年第5期北京时间：

作者：刘祥, 陈春琳, 王杨科, 俱雄, 吴三桥, 张涛

单位：陕西理工学院生物科学与工程学院, 汉中 723001

摘要：为探索骨桥蛋白(OPN)调控骨代谢及与肿瘤的关系,本试验利用DNAMAN与Mega 5.02软件分析OPN蛋白系统进化关系;采用RT-PCR与分子克隆方法制备OPN蛋白表达载体;利用SDS-PAGE电泳切胶纯化、尿素浓度梯度复性获得OPN蛋白,免疫小鼠制备OPN蛋白多克隆抗体;采用ELISA法检测抗体滴度,Western blotting检测抗血清特异性。OPN序列的同源性比对分析发现,在不同进化层次动物中均存在Arg-Gly-Asp(RGD)短肽重复序列;OPN序列系统进化分析显示,OPN在动物间具有明显的进化趋势;提取小鼠肝脏RNA,OPN重组载体双酶切、DNA测序鉴定结果及蛋白表达、纯化条带大小均与预测一致;ELISA法确认OPN抗血清滴度达1:1 600;Western blotting证实抗血清具有很好的特异性。结果表明本试验对OPN序列进行了遗传进化分析,成功克隆、表达、纯化及复性OPN蛋白,并制备、鉴定了小鼠多克隆抗体。

关键词：OPN蛋白;RT-PCR;多克隆抗体;ELISA;Westernblotting

基金资助：陕西省教育厅科学研究计划项目(2013JK0723);陕西理工学院人才启动项目(SLGQD13-15)