猪圆环病毒2b型Cap蛋白多克隆抗体制备及其生物学特性分析

来源：中国畜牧兽医杂志2015年第5期北京时间：

作者：袁庆, 董博, 高睿泽, 李鹏冲, 任玉东, 任晓峰, 李广兴

单位：1. 东北农业大学动物医学学院, 哈尔滨 150030;2. 东北农业大学电气与信息学院, 哈尔滨 150030

摘要：为了使猪圆环病毒2b型(PCV2b)Cap蛋白在猪圆环病毒病等疾病的诊断和防制方面取得更有效的应用,本试验将编码PCV2b Cap蛋白的ORF2基因克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,并构建pET-32a-ORF2重组质粒,重组质粒转化大肠杆菌BL21受体菌后,通过IPTG诱导表达重组蛋白,将重组蛋白用镍柱进行纯化并免疫大白兔,制备兔抗PCV2b Cap蛋白的多克隆抗体。利用ELISA、Western blotting、间接免疫荧光及病毒交叉反应等试验对制备的多克隆抗体进行生物学特性检测。ELISA检测结果显示,该抗体效价可达到1:216;Western blotting检测结果显示,该多克隆抗体可与PCV2b产生特异性的反应条带,说明其具有较好的反应活性;间接免疫荧光试验结果显示,该多克隆抗体能识别感染PK-15细胞中的PCV2b,说明该多克隆抗体具有鉴别诊断PCV2b的能力;病毒交叉试验结果显示,该多克隆抗体能与PCV2b反应,而不与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪轮状病毒(PRoV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)等猪源病毒发生交叉反应,表明该多克隆抗体具有高度特异性。本试验制备的抗PCV2b Cap蛋白多克隆抗体为PCV2b病原特性研究及该病的临床检测奠定基础。

关键词：猪圆环病毒2b型;Cap蛋白;原核表达;多克隆抗体;生物学特性

基金资助：国家自然科学基金(31200122、31270187);教育部科学研究重点项目(212038);哈尔滨市科技局"优秀学科带头人"研究专项资金(2012RFXXN009)