可定点整合的无筛选标记LacS基因表达载体的构建与鉴定

来源：中国畜牧兽医杂志2015年第6期北京时间：

作者：闫涛, 王瑞瑶, 朱和平, 苏晓田, 王亚娟, 李浩天, 周欢敏

单位：内蒙古农业大学生命科学学院, 呼和浩特 010018

摘要：试验旨在构建一个能够定点整合且无筛选标记基因的半乳糖苷酶基因LacS表达载体.本研究以pEGFP-N1质粒为原始框架,通过PCR及限制性酶切位点在pEGFP-N1质粒的标记基因两端添加两个同向LoxP序列,在多克隆位点上游添加能够定点整合的attB序列,最后再将目的基因BC promoter-LacS-PolyA通过限制性酶切位点插入多克隆位点.每一步都进行PCR、酶切及测序鉴定.PCR产物及酶切片段大小符合预期结果,测序结果也与相应寡核苷酸序列一致,证明各个基因片段正确地连接到载体相应位置.本试验成功构建了可定点整合的无筛选标记半乳糖苷酶基因表达载体pEGFP-N1-LacS.

关键词：定点整合;无筛选标记;LacS;pEGFP-N1质粒

基金资助：内蒙古家畜繁育生物技术(20091407)