稳定高效表达猪CD163的Marc-145细胞系的构建与鉴定

来源：中国畜牧兽医杂志2015年第8期北京时间：

作者：吴香菊, 李芳韬, 陈蕾, 丛晓燕, 孙文博, 于江, 陈智, 郭立辉, 吴家强, 杜以军, 赵孝民, 王金宝

单位：1. 山东农业大学动物科技学院, 山东省动物生物工程与疾病防治重点实验室, 泰安 271000;2. 山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室, 济南 250100;3. 山东省农业科学院畜牧兽医研究所, 济南 250100

摘要：试验旨在构建一株高效表达猪CD163(pCD163)的Marc-145细胞系,为猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的临床分离和疫苗生产奠定基础。根据GenBank中序列设计引物从猪肺泡巨噬细胞(PAM)中扩增pCD163基因,将其插入真核表达载体pCI-neo构建真核表达质粒pCI-pCD163,将该重组质粒转染Marc-145细胞,通过G418筛选、单克隆化并扩大培养筛选获得表达pCD163的Marc-145细胞系,IFA、Western blotting鉴定其表达情况。IFA结果显示,构建的pCD163-Marc细胞系中荧光明显亮于普通Marc-145细胞;Western blotting结果显示,pCD163-Marc细胞系中CD163蛋白表达量约为对照Marc-145细胞中CD163蛋白表达量的8.7倍。且该细胞系可稳定传至20代,各代次之间表达量无差异。证明高效表达猪CD163的Marc-145细胞系构建成功。

关键词：Marc-145;CD163;稳定细胞系

基金资助：山东省自然科学杰出青年基金(JQ201411);国家自然科学基金(31170146、31370189);公益性行业(农业)科研专项(201303046);中国博士后科学基金特别资助项目(2014T70645);山东省优秀中青年科学家科研奖励基金(BS2012NY012);山东省现代农业产业技术体系(SDAIT-06-022-06);山东省农业科学院科技创新重点项目(2014CXZ08-2、2014CGPY04);山东省农业科学院青年英才培养计划经费资助