猪Oct4-EGFP多能性报告载体的构建与验证

来源：中国畜牧兽医杂志2015年第8期北京时间：

作者：朱蒙, 付博, 刘娣, 杨秀芹

单位：1. 东北农业大学动物科学技术学院, 哈尔滨 150030;2. 黑龙江省农业科学院畜牧研究所, 哈尔滨 150086

摘要：本研究旨在构建一套猪Oct4-EGFP多能性报告载体,可在不破坏细胞的前提下研究Oct4的表达规律,从而有利于早期胚胎发育研究及干细胞的研究。试验采用无缝克隆(In-Fusion PCR cloning)技术,将Oct4启动子序列直接重组到pEGFP-N1载体上,用Oct4代替质粒pEGFP-N1中增强型绿色荧光蛋白(EGFP)原有的CMV启动子构建出Oct4-EGFP报告载体,并用脂质体转染技术转染入大白猪胎儿成纤维细胞中,分析Oct4-EGFP报告载体,表达情况。结果发现,经PCR及测序验证,成功构建了Oct4-EGFP多能性报告载体,并在孤雌囊胚上初步验证了载体的有效性;经过脂质体转染,经筛选及PCR鉴定,获得了8株整合有Oct4-EGFP多能性报告载体的转基因细胞。研究结果表明,运用无缝克隆技术可高效率构建Oct4-EGFP多能性报告载体,且获得的转基因阳性细胞可为猪胚胎早期发育和胚胎干细胞研究奠定技术基础。

关键词：猪;胚胎;转基因;绿色荧光蛋白;无缝克隆

基金资助：国家自然科学基金(31201804、31101700);黑龙江省自然科学基金(QC2013C021);黑龙江省博士后基金(LBr-211032)