牛结核分枝杆菌实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

来源：中国畜牧兽医杂志2015年第8期北京时间：

作者：程振涛, 岳筠, 张华, 周碧君, 文明, 王开功, 欧德渊, 覃岚, 徐春志

单位：1. 贵州大学动物科学学院, 贵阳 550025;2. 贵州省动物疫病预防控制中心, 贵阳 550008;3. 贵阳市动物疫病预防控制中心, 贵阳 550081

摘要：为建立可应用于快速检测奶牛结核病、评估鲜乳污染状况、追溯传播途径的试验方法,本研究根据牛结核分枝杆菌基因组设计合成特异性引物,建立实时荧光定量PCR方法,并对反应条件进行优化,构建标准曲线,评价该方法的性能。结果显示,本研究所建立的实时荧光定量PCR方法能有效检测牛结核分枝杆菌目的基因,其最佳引物浓度为400 nmol/L,最佳退火温度为52 ℃。所构建的标准曲线相关性好,可用于样本的定量检测。该方法的性能评价显示,其最小检出模板浓度为80.24 ng/L,且该方法具有较好的特异性、可重复性,可对鲜乳样本进行检测。试验结果表明,本研究所建方法可用于牛结核分枝杆菌的定性和定量检测,这为奶牛结核病的诊断与净化及鲜乳食品安全评估提供重要技术。

关键词：牛结核分枝杆菌;实时荧光定量PCR;建立;应用

基金资助：贵阳市科技计划项目(筑科合同[2012]207号);贵州省农业攻关项目(黔科合NY字[2014]3042号);贵州省农业攻关项目(黔科合NY字[2011]3061号)