猪细胞周期蛋白依赖性激酶2多克隆抗体的制备与鉴定

来源：中国畜牧兽医杂志2015年第8期北京时间：

作者：李晓蓉, 唐青海, 卜宾, 毛倩倩, 李羽, 唐存多, 姚伦广, 焦铸锦, 阚云超

单位：南阳师范学院, 南阳市兽医生物工程技术研究中心, 河南省伏牛山昆虫生物学重点实验室, 昆虫生物反应器河南省工程实验室, 南阳 473061

摘要：为研究猪细胞周期蛋白依赖性激酶2(pCDK2)的生物学功能,本试验构建重组原核表达载体pET28a-pCdk2,转化大肠杆菌BL21 (DE3)受体菌,用IPTG诱导重组蛋白(rpCDK2)表达并进行SDS-PAGE和Western blotting鉴定,蛋白经纯化及与弗氏佐剂乳化后免疫家兔制备多克隆抗体。分别用Western blotting和免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)检测抗体的免疫活性。结果显示,成功表达了rpCDK2蛋白,该蛋白以可溶性和包涵体两种形式存在,可溶性rpCDK2蛋白分子质量约为38 ku,包涵体rpCDK2蛋白在38~43 ku间有3种不同分子质量形式;IPMA检测结果显示,所制备的pCDK2蛋白多克隆抗体与猪肾细胞(PK-15)和猪睾丸细胞(ST)免疫染色呈特异性反应,且Western blotting分析显示,多克隆抗体与这两种细胞的总蛋白反应出现4条特异性条带(分子质量在34~50 ku之间),可能跟pCDK2的多种磷酸化形式有关。本试验利用原核表达系统成功制备了rpCDK2蛋白,并制备了免疫活性和特异性良好的pCDK2蛋白多克隆抗体,为该蛋白生物学功能及相关疾病研究提供了基础材料。

关键词：猪细胞周期蛋白依赖性激酶2;多克隆抗体;鉴定

基金资助：国家自然基金青年基金(31101837);河南省重点科技攻关项目(142102110101);南阳师范学院引进人才专项项目(70640)