口蹄疫病毒核酸试纸条检测方法的建立

来源：中国畜牧兽医杂志2015年第9期北京时间：

作者：龚真莉, 蒋韬, 祁淑芸, 陈国栋, 刘艳红, 李勇

单位：1. 中国农业科学院兰州兽医研究所, 家畜疫病病原生物学国家重点实验室, 农业部畜禽病毒学重点开放实验室, 兰州 730046;2. 中农威特生物科技股份有限公司, 兰州 730046

摘要：本研究通过核酸探针与免疫层析相结合的方法,建立了一种简单、敏感、特异的检测口蹄疫病毒的方法。试验利用RT-PCR方法获得口蹄疫病毒3D核苷酸片段,在引物中设计了灵敏度高、特异性好的核酸探针——生物素和地高辛,使扩增产物结合探针。利用胶体金的放大原理将链霉亲和素与金颗粒形成胶体金混合物,从而与RT-PCR产物中的生物素探针结合。硝酸纤维素膜上端标记生物素化山羊抗兔IgG作为指控条带,下端标记抗地高辛抗体以捕获RT-PCR产物中的地高辛探针。组装金标试纸条,检测RT-PCR产物,结果表明该核酸试纸条可以检测到 0.3×10-3~3×10-3 μg/μL,敏感性高于琼脂糖凝胶电泳,两种方法的符合率高,核酸试纸条检测方法是一种敏感性高、成本低且费时短的新型检测方法。该方法为口蹄疫病毒检测提供了一种新的思路。

关键词：口蹄疫病毒;D基因')">3D基因;核酸试纸条;生物素探针;地高辛探针

基金资助：甘肃省科技重大专项计划项目(1002NKDA037);甘肃省农业科技成果转化资金计划(1305NCNA143)