牛乳头状瘤病毒13型L1基因的克隆及原核表达

来源：中国畜牧兽医杂志2015年第9期北京时间：

作者：赵天靖, 贾晓晓, 史巧芸, 郭莳雨, 庞峰, 朱华培, 徐开莲, 李亚颖, 彭冬梅, 李国华, 王凤阳

单位：海南大学农学院, 海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室, 海口市动物基因工程重点实验室, 海口 570228

摘要：本研究旨在克隆并表达牛乳头状瘤病毒13型(BPV13)L1基因。以BPV13基因组为模板,通过PCR技术扩增得到大小1 494 bp的目的片段,同时用BamHⅠ和Hind Ⅲ分别对目的片段和pET28a(+)载体进行双酶切,将双酶切后的L1基因片段克隆至原核表达载体pET28a(+),构建pET28a-L1重组质粒,双酶切和测序鉴定正确后转入大肠杆菌BL21(DE3)受体菌中,筛选出最佳IPTG浓度和最佳诱导时间后进行诱导表达,进行SDS-PAGE和Western blotting检测。结果表明,L1基因正确插入到原核表达载体pET28a(+)中;IPTG诱导后含重组质粒pET28a-L1的表达菌成功表达了带His标签的融合蛋白;SDS-PAGE电泳结果显示融合蛋白分子质量为60 ku,与预期大小一致,超声破菌后,SDS-PAGE电泳显示融合蛋白存在于沉淀中;Western blotting验证为带His标签的融合蛋白。本试验为进一步研究BPV13 L1基因的功能及为BPV13有效DNA疫苗的研制奠定基础。

关键词：牛乳头状瘤病毒13型(BPV13);L1;克隆;原核表达

基金资助：海南大学中西部计划项目(ZXBJH-XK002)