牛流行热病毒糖蛋白基因的原核表达与抗原性鉴定

来源：中国畜牧兽医杂志2015年第9期北京时间：

作者：李志, 郑福英, 高闪电, 王素艳, 岳城, 殷宏

单位：1. 新疆农业大学动物医学学院, 乌鲁木齐 830052;2. 中国农业科学院兰州兽医研究所, 家畜疫病病原生物学国家重点实验室, 甘肃省动物寄生虫重点实验室, 兰州 730046;3. 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心, 扬州 225009

摘要：为探索可用来开发牛流行热病毒(bovine ephemeral fever virus,BEFV)疫苗和诊断试剂的候选基因,本研究针对BEFV糖蛋白(G)基因设计了2对特异性引物,用PCR方法扩增基因片段,PCR产物经Xho Ⅰ和Nde Ⅰ双酶切后亚克隆到表达载体pET-30上,将鉴定正确的重组质粒(480-pET-30、1107-pET-30)转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,培养阳性菌株D600 nm值为0.6~1.0,37 ℃下用1.0 mmol/L IPTG诱导表达目的蛋白,将其纯化之后进行SDS-PAGE和Western blotting免疫原性分析。同时,应用间接ELISA、动物免疫试验及交叉反应试验对目的蛋白进行分析。结果表明,首次发现的1 107 bp基因片段是分段表达的,具有很好的生物活性和特异性,更适合作为开发疫苗和诊断试剂的候选基因,为今后建立BEFV的血清学诊断方法及疫苗研发提供了理论基础。

关键词：牛流行热病毒;原核表达;免疫原性分析

基金资助：农业科技创新工程(ASTIP);国家农业公益性行业科研专项"重要牛羊虫媒病毒病防控关键技术研究与应用"项目(201303035);国家肉牛牦牛产业技术体系(NBCIS-CARS-38)