猪链球菌rGDH蛋白原核表达载体的构建及免疫原性分析

来源：中国畜牧兽医杂志2015年第10期北京时间：

作者：李书光, 张娜, 程立坤, 苗立中, 刘吉山, 杨立芳, 沈志强

单位：1. 山东省滨州畜牧兽医研究院, 滨州 256600;2. 山东绿都生物科技有限公司, 滨州 256600

摘要：谷氨酸脱氢酶(GDH)在猪链球菌35个血清型中都存在,是一种具有免疫原性的保护性抗原。本试验PCR扩增出GDH基因,酶切定向插入pET-32a中构建表达载体pET-32a-GDH,将其转化E.coli BL21(DE3)表达菌中,培养并诱导表达rGDH蛋白,产物纯化后免疫新西兰白兔,免疫攻毒保护试验检验该蛋白的免疫原性。PCR试验获得约1 300 bp的GDH基因,双酶切pET-32a-GDH表达载体获得5.4和1.3 kb的片段,IPTG诱导表达获得融合蛋白,免疫保护结果达到70%。结果表明,本试验成功构建表达猪链球菌GDH蛋白的原核表达载体pET-32a-GDH,rGDH蛋白以蜂胶为佐剂免疫模型动物后,免疫保护率达到70%,为猪链球菌亚单位疫苗的研制提供了技术支持。

关键词：猪链球菌;谷氨酸脱氢酶(GDH);原核表达;免疫原性

基金资助：山东省自然科学基金青年基金项目(ZR2014CQ009);滨州市科技发展计划项目(2013GG0304);山东省现代农业产业技术体系生猪产业创新团队(SDAIT-06-011-14)