反转录病毒载体RCASBP介导的EGFP基因在DF-1细胞中的表达

来源：中国畜牧兽医杂志2015年第10期北京时间：

作者：秦建如, 黎娜铭, 许长剑, 廖明, 曹伟胜

单位：华南农业大学兽医学院, 农业部兽用疫苗创制重点实验室, 广州 510642

摘要：为建立反转录病毒载体RCASBP介导的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因在DF-1细胞中的表达体系,本研究将PCR获得的EGFP基因插入反转录病毒载体RCASBP,构建重组反转录病毒载体RCASBP-EGFP,之后将重组载体转染DF-1细胞;用基于禽白血病病毒(ALV) p27抗原的ELISA检测盲传至第4代的细胞上清,ELISA阳性结果说明重组病毒拯救成功;荧光显微镜观察发现80%以上DF-1细胞都有明显的绿色荧光信号,证明DF-1细胞表达绿色荧光蛋白;对DF-1细胞基因组进行特异性PCR检测,扩增出特异性条带说明重组反转录病毒载体RCASBP-EGFP携带的EGFP基因整合到DF-1细胞的基因组中。本研究建立的RCASBP介导反转录病毒表达体系为研究ALV基因的结构和功能奠定了基础。

关键词：禽白血病病毒;反转录病毒载体RCASBP;增强型绿色荧光蛋白基因;DF-1细胞

基金资助：国家肉鸡产业技术体系(CARS-42-G09);农业部公益性行业科研专项(201203055);广东省科技计划项目(2012A020100001)