牛病毒性腹泻病毒LAMP检测方法的建立与应用

来源：中国畜牧兽医杂志2015年第12期北京时间：

作者：李家伟, 郭利, 杨勇, 王建科, 张淑琴, 张加力, 程世鹏

单位：1. 中国农业科学院特产研究所, 特种动物分子生物学重点实验室, 长春 130112;2. 吉林农业大学研究生院, 长春 130118

摘要：针对牛病毒性腹泻病毒(BVDV) 5'UTR基因(GenBank登录号:AY278459.1)序列设计4条特异性环介导等温扩增 (LAMP) 引物,特异性识别靶基因序列上4个独立区域,采用LAMP技术,利用实时浊度仪实时检测LAMP 反应过程中所产生的焦磷酸镁白色沉淀,实时监测反应液浊度来判断反应结果,实现对扩增反应全过程的监控,建立BVDV的LAMP快速检测方法。通过实时浊度仪在恒温63 ℃下50 min完成检测,对方法的特异性、灵敏度、重复性进行了评价。结果显示,经优化该方法只检测BVDV阳性,特异性强;病毒10-6倍稀释时仍能被检测到,比PCR方法灵敏度至少高100倍;重复性良好。LAMP实时浊度法具有简单、快速、灵敏度高、特异性强的优势,为BVDV的临床检测提供了一种简单快速的试验手段。

关键词：牛病毒性腹泻病毒;环介导等温扩增技术;PCR

基金资助：牛呼吸道综合征临床快速诊断试剂盒的研制(20130206024NY);中国农业科学院"创新工程"项目