分枝杆菌分型三重PCR检测方法的建立及应用

来源：中国畜牧兽医杂志2016年第1期北京时间：

作者：娄忠子, 刘聪暖, 贾万忠, 周继章, 闫鸿斌, 曹小安, 李立, 李兆才, 付宝权

单位：1. 中国农业科学院兰州兽医研究所, 家畜疫病病原生物学国家重点实验室, 农业部兽医公共卫生重点开放实验室, 甘肃省动物寄生虫病重点实验室, 兰州 730046;2. 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心, 扬州 225009

摘要：本研究旨在建立一种快速鉴定分枝杆菌的三重PCR方法,并比较分析其在临床检测中的可靠性。根据已发表的结核分枝杆菌、牛分枝杆菌和非洲分枝杆菌rv 3036c基因,结核分枝杆菌rv 1970f基因(RD7)和牛分枝杆菌pncA基因的序列,改造并设计合成了3对特异性扩增引物,建立了一种能对分枝杆菌样品进行初步鉴定的三重PCR方法。结果显示该方法可针对rv 3036c、rv 1970f和pncA基因分别扩增出大小为500、125和249 bp的目的片段,能特异性检测出结核分枝杆菌(500和125 bp两条带)和牛分枝杆菌(500和249 bp两条带),并可将结核分枝杆菌、牛分枝杆菌与其他分枝杆菌加以区分。本方法的检测灵敏度为50 pg/μL模板基因组DNA。对86株抗酸染色阳性菌进行三重PCR鉴定,鉴定结果与细菌16S rDNA和ITS序列测定结果一致,检测准确度为100%,优于生长特征和生化试验鉴定。

关键词：分枝杆菌;结核分枝杆菌;牛分枝杆菌;三重PCR;初步鉴定

基金资助：甘肃省科技支撑计划农业类项目(1304NKCA162);甘肃省农业生物技术研究与应用开发项目(GNSW-2013-27)