乳品中大肠杆菌PMA-qPCR活菌检测方法的建立

来源：中国畜牧兽医杂志2016年第2期北京时间：

作者：盖冬雪, 任洪林, 卢士英, 胡盼, 孟宪梅, 刘熙, 宋德刚, 金雯, 张嵩, 常江, 刘艳艳, 柳增善

单位：1. 吉林大学人兽共患病研究所, 人兽共患病教育部重点实验室, 长春 130062;2. 吉林工商学院, 粮油食品深加工 吉林省高校重点实验室, 长春 130000;3. 广泽乳业有限公司, 长春 130000;4. 山东省东营市利津县第二中学, 东营 257400

摘要：本试验旨在建立一种乳品中大肠杆菌PMA-qPCR活菌检测方法.优化qPCR检测方法,探究菌浓度为1×108 CFU/mL的大肠杆菌活菌悬液、热致死菌悬液细胞数来确定不同的PMA剂量、暗孵育时间、曝光时间对死菌抑制效果的影响,确定最佳PMA处理方案.结果表明,qPCR检测可特异性扩增大肠杆菌,1×108 CFU/mL的大肠杆菌经90 ℃水浴30 s全部致死后,采用10 μg/mL的 PMA暗孵育15 min后冰上曝光10 min为最佳处理方案,这种处理方案可最大程度抑制死细胞信号,而对活细胞几乎没有影响,样品中微生物初始浓度不低于1×108 CFU/mL时较稳定,得到标准曲线回归方程y=-3.356x+47.413,R2=0.9989,最低检测限为103 CFU/mL,加标样本检测结果与实际相符.该方法为利用PMA-qPCR检测食品中的活大肠杆菌杆菌奠定了基础.

关键词：大肠杆菌;叠氮溴化丙啶;qPCR;计数

基金资助：吉林省重点科技攻关项目(20140204065NY);吉林省世行贷款农产品质量安全项目(2011-Y36);吉林省科技发展计划项目(201205054);粮油食品深加工省高校重点实验室项目(2014001)