环形泰勒虫3-磷酸甘油醛脱氢酶的原核表达、多克隆抗体制备及亚细胞定位

来源：中国畜牧兽医杂志2016年第2期北京时间：

作者：赵洪喜, 刘军龙, 杨聪山, 赵帅阳, 刘娟, 刘光远, 殷宏, 关贵全, 罗建勋

单位：1. 中国农业科学院兰州兽医研究所, 家畜疫病病原生物学国家重点实验室, 甘肃省动物寄生虫病重点实验室, 兰州 730046;2. 宁夏大学农学院, 银川 750021;3. 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心, 扬州 225009

摘要：为了研究环形泰勒虫3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)的功能,本试验利用PCR技术从环形泰勒虫裂殖体cDNA中扩增环形泰勒虫GAPDH (TaGAPDH)基因,将扩增产物克隆到原核表达载体pET-30a(+)中,并转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行融合蛋白诱导表达,融合蛋白纯化后免疫家兔,制备多克隆抗体,分别用间接ELISA和Western blotting检测抗体的效价和特异性;利用激光共聚焦荧光显微镜观察TaGAPDH蛋白在环形泰勒虫裂殖体中的亚细胞定位.结果显示,克隆得到了TaGAPDH全长基因,大小为1 020 bp;SDS-PAGE分析结果显示,融合蛋白大小约44 ku,且以包涵体形式存在.制备的多克隆抗体效价高达1:12 800,具有很高的特异性;亚细胞定位显示TaGAPDH蛋白主要分布于环形泰勒虫裂殖体细胞质内.以上结果表明本试验成功克隆表达了TaGAPDH基因,并制备了针对TaGAPDH蛋白的兔多克隆抗体,为筛选环形泰勒虫病疫苗、药物靶点及研究环形泰勒虫能量代谢奠定了基础.

关键词：环形泰勒虫;3-磷酸甘油醛脱氢酶;多克隆抗体

基金资助：国家重点基础研究发展计划(973计划)(2015CB150300);国家自然科学基金项目(31372432、31402189);农业科技创新工程(ASTIP);PiroVAC (KBBE-3-245145);948项目(2010-S06);国家肉牛牦牛产业技术体系(NBCIS CARS-38)