基于Nc2和Nc5基因的新孢子虫PCR方法的建立

来源：中国畜牧兽医杂志2016年第3期北京时间：

作者：陈千林, 王振宝, 吉尔格力, 刘梦丽, 许正茂, 巴音查汗

单位：1. 新疆农业大学动物医学学院, 乌鲁木齐 830052;2. 伊犁出入境检验检疫局综合技术服务中心, 伊宁 835000;3. 巴音郭楞职业技术学院生物工程系, 库尔勒 841000

摘要：本试验筛选了新孢子虫病PCR检测的引物,运用《新孢子虫病检疫技术规范》(SN/T 3499—2013)对根据犬新孢子虫Nc2和Nc5基因设计的PCR引物进行了评价。此外,同时运用F1/R1、F2/R2和SN/T 3499 F/SN/T 3499 R共同对14份荷斯坦牛和19份西门塔尔牛全血DNA进行PCR检测,旨在筛选出特异性较好的引物,建立新孢子虫病PCR检测方法和了解当地不同品系牛患新孢子虫病的感染率。结果显示,3对引物分别扩增出105、128和231 bp目的片段,均与预期目的片段大小相符;其中,F1/R1与SN/T 3499 F/SN/T 3499 R的最低检测量相同,为19.9 fg/μL,F2/R2最低检测量为199 fg/μL,说明F1/R1和SN/T 3499 F/SN/T 3499 R引物的敏感性更好;运用F1/R1、F2/R2引物分别对19.9 pg/μL和199 fg/μL模板重复进行4次扩增,均出现了较明亮的扩增条带,证明两对引物重复性较好。33份血液样品共检出6份阳性DNA,阳性率分别为21.43%和15.79%,检出复合率为100%。以上结果说明F1/R1和F2/R2引物均可作为新孢子虫病PCR的诊断引物,本试验初步建立了新孢子虫PCR方法,同时初步了解了当地牛群中新孢子虫感染情况,为有效预防和控制新孢子虫病提供了科学的理论依据。

关键词：新孢子虫;新孢子虫病;牛;PCR

基金资助：自治区科技成果转化专项资金项目(201454129);库尔勒市重点科技计划项目(2013051108)