猪瘟病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及优化

来源：中国畜牧兽医杂志2016年第3期北京时间：

作者：冯春花, 朱艳平, 郭东光, 岳锋

单位：1. 新乡市动物疫病预防控制中心, 新乡 453003;2. 新乡学院生物技术研究中心, 新乡 453003

摘要：以原核表达、纯化的猪瘟病毒(CSFV)E2主要抗原区蛋白为目标检测物,通过对各反应条件的筛选和优化,建立了检测CSFV抗体的间接ELISA检测方法。结果表明,本研究的最佳抗原包被浓度和最佳血清稀释度分别为1.0 μg/mL和1:200;最佳抗原包被条件和最佳封闭时间均为37 ℃ 1 h;最佳酶标二抗稀释度和作用时间分别为1:10 000和37 ℃ 45 min;阴性临界值判断标准为当D450nm<0.30时猪血清样品为CSFV抗体阴性;批内和批间重复试验变异系数分别为4.8%和6.9%,表明该检测方法具有较高的稳定性;特异性试验结果表明,间接ELISA方法与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒(PCV)、猪细小病毒(PPV)阳性血清均无交叉反应;应用该间接ELISA方法随机检测80份猪血清样品,与进口阻断ELISA试剂盒相比其阳性符合率为83.58%,阴性符合率为76.92%,总体符合率为80.25%。结果表明本试验建立的间接ELISA方法具有很好的临床应用价值。

关键词：猪瘟病毒;E2蛋白;间接ELISA;抗体检测

基金资助：河南省基础与前沿技术研究(122300410003);国家自然科学基金(31201877);新乡学院博士科研启动经费(1399020164);河南省教育厅科学技术研究重点项目(13A230837)