水牛HSD17B1基因克隆分析及其真核表达载体构建

来源：中国畜牧兽医杂志2016年第3期北京时间：

作者：朱鹏, 庞春英, 邓廷贤, 段安琴, 陆杏蓉, 陈明棠, 杨炳壮, 梁贤威

单位：中国农业科学院广西水牛研究所, 广西水牛遗传繁育重点实验室, 南宁 530001

摘要：为了阐明水牛17β-羟类固醇脱氢酶1 (17 beta-hydroxysteroid dehydrogenase 1,HSD17B1)基因对水牛繁殖性能的影响,本试验采用了3'-RACE克隆获得HSD17B1基因,并对其核苷酸序列和蛋白质序列进行了生物信息学分析,通过构建其真核表达载体并转染293T细胞验证所构建载体的准确性。结果表明,水牛HSD17B1基因编码区长954 bp,3'-UTR区长58 bp,编码317个氨基酸。BLAST分析显示水牛HSD17B1核苷酸序列与牛、绵羊、猪、马、犬、非洲象和人的相似性分别为100%、100%、92%、94%、87%、87%和87%,系统进化树分析结果表明,HSD17B1基因在不同物种及进化的过程中具有高度保守性。蛋白质分析结果表明HSD17B1蛋白呈弱酸性,无信号肽,亚定位于细胞质,存在type1_17beta-HSD-like_SDR_c、PRK05993、LPOR和FabG等结构域。试验成功构建了水牛HSD17B1基因真核表达载体pEGFPN1-HSD17B1,转染293T后,产生较强的绿色荧光信号,表明能够形成HSD17B1-EGFP融合蛋白。水牛HSD17B1基因的克隆及其真核表达载体的成功构建,为今后阐明HSD17B1基因在水牛卵泡及胚胎发生过程中的作用及分子机制奠定了理论基础。

关键词：水牛;HSD17B1基因')">HSD17B1基因;克隆分析;载体构建

基金资助：农业部转基因重点项目(2014ZX0801012B);桂科合(14123001-5);水牛人才1502