猪乙型脑炎病毒E蛋白结构域Ⅲ原核表达和抗原性分析

来源：中国畜牧兽医杂志2016年第4期北京时间：

作者：厚华艳, 丁玲玲, 吕茂杰, 杨保收

单位：1. 天津瑞普生物技术股份有限公司瑞普生物研究院, 天津 300308;2. 农业部生物兽药创制重点实验室, 天津 300308

摘要：为分析猪乙型脑炎病毒(JEV)E蛋白Ⅲ结构域的抗原性,本研究克隆了JEV疫苗株SA14-14-2的E蛋白结构域Ⅲ,并通过pET-28a载体进行融合表达和纯化。用纯化后蛋白作为免疫原,免疫8周龄BALB/c小鼠,通过SDS-PAGE、Western blotting、间接ELISA及间接免疫荧光方法(IFA)检测小鼠及猪抗体滴度,验证E蛋白结构域Ⅲ的抗原性。SDS-PAGE结果表明融合蛋白以包涵体形式表达;Western blotting、间接ELISA检测结果表明表达产物具有良好的抗原性;纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠ELISA方法检测特异性抗体滴度可达1×105;猪JEV阳性血清ELISA抗体滴度可达5.1×104;IFA结果表明JEV E Ⅲ蛋白产生的抗血清能很好的识别乙型脑炎病毒抗原。以上结果表明,表达、纯化的重组JEV E Ⅲ蛋白具有良好的抗原性。本试验结果为建立以E蛋白结构域为抗原的诊断方法提供了重要依据。

关键词：猪乙型脑炎病毒;E蛋白;结构域Ⅲ;诊断抗原

基金资助：瑞普生物研究院猪乙型脑炎耐热保护剂活疫苗专项基金项目(RPBVI20130008)