Fat-1基因载体构建及其在家鸡中的体外表达

来源：中国畜牧兽医杂志2016年第4期北京时间：

作者：王颖, 顾真真, 郭若婷, 欧科鹏, 刘乙, 刘小军

单位：1. 石河子大学动物科技学院, 石河子 832003;2. 河南农业大学牧医工程学院, 郑州 450002

摘要：试验旨在构建一种适合于家禽体外表达的ω-3脂肪酸脱氢酶Fat-1基因的真核生物表达载体,为后续转基因鸡的生产奠定基础。根据家鸡密码子使用频率,对秀丽隐杆线虫Fat-1基因进行优化改造;将改造后的Fat-1基因(cFat-1)连接至pLL3.7表达载体,构建重组质粒pLL3.7-cFat-1;经PCR、酶切、序列分析等手段对重组质粒进行鉴定;用胰酶消化法培养鸡成纤维细胞,利用TurboFectTM转染试剂将pLL3.7-cFat-1转染体外培养的成纤维细胞;通过RT-PCR检测和绿色荧光观察分析cFat-1基因在细胞中的表达。结果表明cFat-1基因在鸡成纤维细胞中高效转录并表达,成功构建了可在家禽体外表达cFat-1基因的特异性表达载体。本研究首次获得可在家禽体外表达cFat-1基因的转基因细胞系,证实了经基因改造后cFat-1基因可在家禽体外的高效转录和表达,为后续制备富含ω-3脂肪酸的转基因鸡奠定基础。

关键词：ω-3脂肪酸脱氢酶')">ω-3脂肪酸脱氢酶;载体构建;成纤维细胞;基因表达;转基因

基金资助：石河子大学校级育种专项(gxjs2012-yz06)