5'端非病毒核苷酸对猪繁殖与呼吸综合征病毒感染性克隆拯救的影响

来源：中国畜牧兽医杂志2016年第5期北京时间：

作者：韩焘, 周智, 赵柏林, 原霖, 翟新验

单位：中国动物疫病预防控制中心, OIE猪繁殖与呼吸综合征参考实验室, 北京 102618

摘要：为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)5'端非病毒核苷酸对感染性克隆拯救的影响,优化PRRSV反向遗传操作平台,本试验构建了含有CMV启动子的PRRSVJXA1-R株全长克隆质粒,在CMV启动子的下游引入锤头核酶序列,并在PRRSV基因组的5'端上游和锤头核酶下游之间引入非病毒核苷酸,分别构建成5'端含有非病毒核苷酸GG和GCTAGC的PRRSV全长感染性cDNA克隆Pgg-PRRSV和PNhe-PRRSV。新构建的两株克隆质粒直接转染BHK-21细胞拯救,48h后用间接免疫荧光检测病毒M蛋白,结果表明两株克隆均可拯救成活,测定Pgg-PRRSV和PNhe-PRRSV转染上清的病毒毒价分别为3.0和1.25TCID50/mL,拯救病毒在Marc-145细胞上传3代后均稳定在6.5TCID50/mL,病毒滴度无明显差异。本研究成功构建了两株5'端上游含有非病毒核苷酸的PRRSV基因组全长感染性cDNA克隆,表明PRRSV的5'端上游含有两个非病毒核苷酸GG拯救效率较高,且5'端的病毒外源核苷酸对拯救的影响仅存在于拯救的最初阶段。

关键词：非病毒核苷酸;猪繁殖与呼吸综合征病毒;感染性克隆;拯救

基金资助：现代农业产业技术体系北京市创新团队建设项目(GWZJ-2009-05)