鉴别猪伪狂犬病病毒的双重PCR方法的建立及初步应用

来源：中国畜牧兽医杂志2016年第5期北京时间：

作者：练斯南, 梁淋, 白挨泉, 崔尚金

单位：1. 佛山科学技术学院, 佛山 528231;2. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所, 北京 100193

摘要：为了检测猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)的感染情况,并进行强弱毒株的鉴别诊断,本研究建立了快速、简便、灵敏度高、特异性强的鉴别猪PRV的双重PCR方法。针对PRVgE和gB基因序列,分别设计了2对特异性引物,通过对退火温度(50~60℃,按照1℃递增)、引物浓度(0.2~1.4μL,依次增加0.2μL)的优化,结果表明,双重PCR反应的最佳退火温度为56℃、最适引物添加量为1μL。特异性试验结果表明,该方法可以扩增出PRVgE(316bp)和gB(432bp)的目的片段,对PCV2、PTV、CSFV、PPV、PRRSV、大肠杆菌的DNA或cDNA均无扩增。敏感性试验结果表明,PRVgE和gB的最低核酸检出量分别为4.4×103和3.3×103拷贝/μL,与单一PCR方法的敏感性相近。应用该方法对广东、广西地区临床送检的56份组织样品进行检测,检测结果显示,强毒感染阳性率为53.6%(30/56),阴性率为46.4%(26/56),未发现有弱毒感染。

关键词：猪;伪狂犬病病毒;双重PCR;检测方法

基金资助：广东省自然科学基金项目(S2013010012475)