猪伪狂犬病病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法的建立

来源：中国畜牧兽医杂志2016年第7期北京时间：

作者：陈如敬, 吴学敏, 陈秋勇, 严山, 车勇良, 王晨燕, 王隆柏, 周伦江

单位：1. 福建省农业科学院畜牧兽医研究所, 福州 350013;2. 福建省畜禽疫病防治工程中心, 福州 350013;3. 福建农林大学动物科学学院, 福州 350002

摘要：本研究根据猪伪狂犬病病毒（pseudorabies virus，PRV）的gE基因序列特点，设计特异性实时荧光定量引物，建立基于SYBR GreenⅠ染料的猪PRV实时荧光定量PCR方法。结果表明，建立的实时荧光定量PCR方法检测猪PRV gE基因在7.53×101~7.53×106 拷贝/μL范围内有较好的线性关系；对猪圆环病毒（porcine circovirus 2，PCV2）、猪细小病毒（porcine parvovirus，PPV）、副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis）和猪链球菌（Streptococcus susi）核酸均未见阳性扩增信号；从生成的熔解曲线可见，建立的方法仅对猪PRV检测出现单一特异峰，其熔解温度（Tm值）为（92.9±0.1）℃，PCV2、PPV、副猪嗜血杆菌和猪链球菌均未见特异性峰值；建立的实时荧光定量PCR方法的组内和组间变异系数分别为0.31%~1.14%和0.42%~1.74%。以上结果表明，本研究建立的猪PRV实时荧光定量PCR方法敏感性高、特异性强、重复性好，为深入开展猪PRV对宿主致病机制的研究提供检测手段。

关键词：猪伪狂犬病毒;gE基因')">gE基因;SYBRGreenⅠ;实时荧光定量PCR

基金资助：福建省属公益类科研专项（2014R1023-13、2015R1023-10）