犬细小病毒NY株VP2蛋白多克隆抗体的制备与鉴定

来源：中国畜牧兽医杂志2016年第7期北京时间：

作者：毛倩倩, 周灵, 唐青海, 卜宾, 唐存多, 焦铸锦, 姚伦广, 阚云超, 杨建伟, 崔尚金

单位：1. 南阳师范学院, 南阳市兽医生物工程技术研究中心, 河南省伏牛山昆虫生物学重点实验室, 昆虫生物反应器河南省工程实 验室, 南阳 473061;2. 吉林农业大学动物科学技术学院, 长春 130118;3. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所, 北京 100193

摘要：试验旨在制备犬细小病毒（canine parvovirus，CPV）VP2蛋白多克隆抗体。构建pET28a-CPV-VP2重组表达质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，经IPTG诱导，SDS-PAGE鉴定融合蛋白的表达，纯化目的蛋白与佐剂混合、乳化制备后作为免疫原，免疫家兔制备VP2蛋白多克隆抗体；采用免疫过氧化物酶单层细胞染色法（immunoperoxidase monolayer assay，IPMA）检测抗体的免疫活性、抗体滴度、病毒滴度及中和活性。结果表明，重组VP2蛋白（rVP2）以包涵体形式存在，分子质量约为72 ku；所制备的多克隆抗体滴度为1 600倍，病毒滴度为107 TCID50 /mL，中和效价为1∶2 884，该抗体与体外培养的CPV呈特异性反应，CPV VP2蛋白的多克隆抗体免疫活性和特异性良好，且中和活性高，为CPV基因工程疫苗的研究和临床治疗奠定了基础。

关键词：犬细小病毒;VP2基因')">VP2基因;多克隆抗体;免疫活性

基金资助：河南省重点科技攻关项目（142102110101）；河南省高等学校重点科研项目（16A230023）；南阳师范学院引进人才专项项目（70640）