NFκB1在奶牛乳腺上皮细胞中的表达与定位

来源：中国畜牧兽医杂志2016年第8期北京时间：

作者：臧艳丽, 古新宇, 黄鑫, 于翠平, 骆超超, 高学军

单位：东北农业大学, 黑龙江省高校农业生物功能基因重点实验室, 哈尔滨 150030

摘要：试验旨在研究奶牛乳腺上皮细胞（bovine mammary epithelial cell, BMEC）中NFκB1的表达与定位变化，以阐明NFκB1对BMEC乳合成的转录调节机理。通过组织块法培养原代细胞，利用BMEC和成纤维细胞对胰蛋白酶敏感性的不同进行纯化和传代；利用Western blotting和免疫荧光染色法检测细胞中角蛋白18和β-酪蛋白的表达以鉴定细胞的纯度和泌乳功能；通过添加0.6 mmol/L蛋氨酸建立氨基酸刺激BMEC泌乳的体外模型；Western blotting和免疫荧光法检测添加蛋氨酸后NFκB1和p-NFκB1表达与定位的变化。结果显示，获得了纯化的BMEC；Western blotting检测发现NFκB1在细胞浆中存在约141和105 ku两种形式，在细胞核中只存在105 ku形式；p-NFκB1（50 ku）主要存在于细胞核内。在添加蛋氨酸后NFκB1的141 ku形式的含量有一定增加；105 ku形式在细胞浆内蛋白水平变化不明显，在细胞核内水平明显升高；p-NFκB1在细胞核中的定位明显增加。结果提示，NFκB1参与BMEC乳合成的转录调节，氨基酸通过促进细胞核内NFκB1磷酸化以调节泌乳相关基因的转录和促进乳合成。

关键词：NFκB1;p-NFκB1;奶牛乳腺上皮细胞;蛋氨酸;乳合成

基金资助：国家高技术研究发展计划（863计划）项目（2013AA102504-03）