水牛MBD3基因克隆分析及其真核表达载体的构建

来源：中国畜牧兽医杂志2016年第8期北京时间：

作者：粟小平, 肖宁, 罗西尔, 雷薇, 崔奎青, 石德顺, 刘庆友

单位：广西大学, 亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室, 南宁 530004

摘要：本研究旨在克隆水牛MBD3基因，进行生物信息学分析，并构建MBD3基因的真核表达载体，为研究MBD3基因在水牛胚胎发育及诱导多能干细胞（iPSCs）中的作用奠定基础。试验从卵巢组织中提取总RNA，反转录得到cDNA，并以此为模板，应用RT-PCR克隆得到MBD3基因，测序并应用相关的生物学软件进行分析；将MBD3基因连接至真核表达载体pEGFP-C1，再将携带目的基因的重组质粒转染HEK293T细胞和水牛胎儿成纤维细胞（BFF），利用RT-PCR及Western blotting方法分析目的基因的表达。结果表明，克隆获得了898 bp的水牛MBD3基因序列，其中编码区全长774 bp，编码257个氨基酸。通过对MBD3基因核苷酸序列的多重比对及进化树分析，MBD3基因在进化中高度保守，特别是MBD结构域，水牛与牛的同源性为100%，与人、猪、猩猩的同源性均为97%。将水牛MBD3基因真核表达载体转染HEK293T细胞和BFF，通过荧光观察、RT-PCR及Western blotting方法鉴定表明，成功构建了水牛MBD3基因的真核表达载体。本研究克隆得到了水牛的MBD3基因，并成功构建了MBD3基因的真核表达载体，为进一步研究MBD3基因在水牛胚胎发育及iPSCs诱导上的作用奠定了基础。

关键词：水牛;MBD3基因')">MBD3基因;DNA甲基化;表观遗传;干细胞

基金资助：国家自然基金（31260552）；国家高技术研究发展计划（863计划）（2013AA102504）