水牛STAT4基因克隆分析及其真核表达载体的构建

来源：中国畜牧兽医杂志2016年第8期北京时间：

作者：朱鹏, 庞春英, 段安琴, 邓廷贤, 陆杏蓉, 梁贤威

单位：中国农业科学院广西水牛研究所, 广西水牛遗传繁育重点实验室, 南宁 530001

摘要：为了阐明水牛信号转导子和转录激活子4（signal transducer and activator of transcription 4, STAT4）基因在水牛卵泡、胚胎发生及泌乳调节过程中的作用及分子机制，本试验采用了3’-RACE克隆获得STAT4基因，并对其核苷酸序列和蛋白质序列进行了信息学分析，通过构建其真核表达载体并转染HEK293T细胞验证所构建载体的准确性。结果表明，水牛STAT4基因编码区长2 247 bp，3’-UTR区长268 bp，编码748个氨基酸。BLAST分析显示，水牛STAT4核苷酸序列与牛、山羊、绵羊、猪、马、犬和人相应序列的同源性分别为99％、99％、99%、95％、93％、93％和92％，系统进化树分析结果表明，STAT4基因在不同物种及进化的过程中具有高度保守性。蛋白质分析结果表明，STAT4蛋白呈弱酸性，无信号肽，定位于细胞质，存在STAT_int、STAT_alpha、STAT_bind和SH2_STAT4等结构域。microRNA靶标预测显示bta-miR-200a、bta-miR-2429和bta-miR-2410等为STAT4 3’-UTR潜在microRNAs。试验成功构建了水牛STAT4基因真核表达载体pEGFPN1-STAT4，转染HEK293T后产生较强的绿色荧光信号，表明能够形成STAT4-EGFP融合蛋白。

关键词：水牛;STAT4基因')">STAT4基因;克隆;生物信息学分析;载体构建

基金资助：农业部转基因重点项目（2014ZX0801012B）；广西国合桂科合（14123001-5）；水牛人才（1502）