羊口疮病毒ORF059基因的真核表达研究

来源：中国畜牧兽医杂志2016年第9期北京时间：

作者：朱姝, 庞峰, 李国华, 李亚颖, 彭冬梅, 杨小健, 聂鑫, 曹瑞勇, 王凤阳, 杜丽

单位：海南大学农学院, 海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室, 海口市动物基因工程重点实验室, 海口 570228

摘要：试验旨在扩增羊口疮病毒（Orf virus，ORFV）ORF059基因并进行真核表达。提取羊ORFV HCE弱毒株基因组为模板，参照GenBank上ORF059的基因序列，利用DNAMAN设计引物，应用PCR扩增ORF059目的片段，凝胶回收后将其连入pEGFP-N1质粒，构建重组质粒pEGFP-ORF059-N1，测序正确后瞬时转染NIH3T3细胞，应用荧光显微镜观察，Western blotting鉴定融合蛋白的表达。结果表明，ORF059基因片段大小为1 005 bp；重组质粒pEGFP-ORF059-N1构建正确；转染pEGFP-ORF059-N1的NIH3T3细胞有明显的绿色荧光；表达的融合蛋白大小约为64 ku。本试验结果为进一步研究ORF059的作用机理奠定了基础。

关键词：羊口疮病毒;ORF059基因')">ORF059基因;真核表达;NIH3T3细胞

基金资助：海南省重大科技计划项目（ZDKJ2016017-01）