猪瘟病毒巢式RT-PCR检测方法的建立与应用

来源：中国畜牧兽医杂志2016年第9期北京时间：

作者：刘梅芬, 王淑娟, 闫若潜, 王东方, 曹伟伟, 赵雪丽, 李勤楠, 李宁

单位：1. 河南省动物疫病预防与控制中心, 郑州 450008;2. 河南科技大学动物科技学院, 洛阳 471003

摘要：为建立一种快速、特异、灵敏的检测猪瘟病毒（classical swine fever virus，CSFV）巢式RT-PCR（nested RT-PCR）方法，本研究参照GenBank中公布的CSFV E2基因保守区域序列设计2对特异性引物，以CSFV总RNA为模板，优化反应条件，建立CSFV nested RT-PCR方法，对其进行特异性、敏感性和重复性试验；利用所建立的方法对35份临床疑似CSFV感染样品进行了应用检测，并对阳性PCR产物进行克隆测序鉴定。结果表明，本研究成功建立了CSFV nested RT-PCR检测方法，能够特异性地扩增CSFV，但对ST正常细胞对照和其他8种病原对照未扩增出任何条带；稳定性和重复性好；敏感性高，最低检测病毒含量为1 TCID50；自35份疑似CSFV感染样品中检出19份阳性样品，PCR阳性产物克隆测序结果表明均为CSFV E2基因片段。本研究成功建立了CSFV nested RT-PCR检测方法，可用于CSFV的快速检测，为CSF的早期检测诊断提供了特异、灵敏的方法。

关键词：猪瘟病毒;巢式RT-PCR;检测;建立;应用

基金资助：河南省科技攻关项目“病死动物无害化处理技术及管理机制研究”（142102310224）